Extracción mediante el kit comercial INSTAGENE

Cada mesa dispone de una levadura (práctica VI) y una bacteria problema (práctica VIII). Las mesas pares utilizarán la levadura y las impares la bacteria correspondiente. En ambos casos, se selecciona una colonia del microorganismo desarrollado en un medio sólido y se resuspende en 1 mL de suero fisiológico estéril. Se agita fuertemente hasta conseguir una suspensión homogénea y se centrifugan a 3000‐5000 rpm durante 3‐5 minutos. Se retira el suero sobrenadante y nos quedamos con el precipitado de células. Cerrar y rotular adecuadamente el tubo.

Extracción de ADN :

1. 1. Al precipitado que tenemos despues de centrifugar le añadimos 200 μL de solución de lisis (agitar previamente).
   2. Mezclar y poner a 56ºC durante 15 min.
   3. Pasado este tiempo agitar en el vórtex 10‐15 segundos por tubo
   4. Poner en un baño a 100ºC durante 8 minutos.
   5. Agitar de nuevo en vórtex 10‐15 segundos por tubo
   6. Centrifugar 1 minuto a máxima velocidad.
   7. Usar el sobrenadante (es donde se encuentra el DNA) para la realización de la PCR o almacenar a ‐20ºC para usar más adelante.

Extracción mediante ciclos de temperatura

A partir de la placa de cultivo puro se cogerá una colonia bacteriana aislada. Tras marcarla con indeleble se procede a picar la colonia con el asa de siembra y pasar a un eppendorf con 100 μl de TE.

1. 1. 1. Incubar en baño a 95ºC durante 5 minutos
      2. Incubar en frío durante 1 minuto
      3. Vortex
      4. Incubar en frío durante 2-4 minutos
      5. Vortex
      6. Repetir todo el ciclo 2 veces más
      7. Centrifugar a 9500 rpm durante 5 minutos
      8. Recuperar 20 μl de la parte superior del sobrenadante y pasarlo a un nuevo eppendorf correctamente rotulado.

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