Contenidos: Extracción de ácidos nucleicos de células fúngicas y bacterianas. Amplificación de regiones barcode del DNA microbiano mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Detección de amplicones específicos por electroforesis en gel de agarosa. Secuenciación y comparación de secuencias en las bases de datos para identificación de género y especie.

Fundamento: El diagnóstico molecular se basa principalmente en dos grandes pilares: la hibridación de los ácidos nucleicos y los métodos de amplificación de los mismos.

Objetivos concretos:

– Utilizar un sistema comercial para lisar células fúngicas y bacterianas y extraer el ácido desoxirribonucleico (ADN) de ambas.

– Aplicar la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para amplificar regiones del ADN que contienen secuencias identificativas de la especie.

– Comparar las secuencias obtenidas con las presentes en las bases de datos en busca del mayor grado de coincidencia, para obtener la identificación de la especie.

Realización práctica:

Cada mesa dispone de una levadura (práctica VI) y una bacteria problema (práctica VIII). Las mesas pares utilizarán la levadura y las impares la bacteria correspondiente.

Microorganismos: Bacteria, Hongo, Virus, ….	Extraer material genético: DNA o RNA	Amplificación del AN mediante PCR

Visualización en gel de agarosa	Secuenciación del amplicón	Comparación de secuencias con las bases de datos

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