Visualización de la cápsula mediante tinción negativa
La cápsula es un factor de patogenicidad crucial en muchos microorganismos, incluyendo bacterias y hongos. Es una capa externa, generalmente compuesta por polisacáridos (aunque en algunos casos pueden ser polipéptidos), que rodea la pared celular o la membrana. No es esencial para la supervivencia del microorganismo en condiciones óptimas, pero le confiere ventajas significativas en ambientes hostiles, especialmente dentro de un huésped.
- Evasión de la Fagocitosis (Principal función).
- Protección contra la Desecación
- Adherencia y Colonización
- Evasión de la Respuesta Inmune (Además de la fagocitosis): Mimetismo molecular y Resistencia al complemento
- Protección contra Agentes Antimicrobianos
- Reserva de nutrientes
La tinción con tinta china es una técnica de tinción negativa que se utiliza comúnmente en microbiología para visualizar la cápsula de ciertos microorganismos, especialmente hongos levaduriformes como Cryptococcus neoformans. La tinta china, al ser un coloide de partículas de carbón, no penetra la cápsula polisacárida del hongo, creando un fondo oscuro y permitiendo que la cápsula aparezca como un halo claro y brillante alrededor de la célula fúngica.
Materiales
- Portaobjetos y cubreobjetos limpios.
- Tinta china
- Asa de siembra
- Microscopio
- Muestra biológica
Procedimiento
- Coloca una gota de tinta china en el centro de un portaobjetos limpio.
- Con un asa de siembra estéril toma una pequeña cantidad de la muestra biológica (por ejemplo, una asada de una colonia fúngica o una gota del sedimento centrifugado). Mezcla suavemente la muestra con la gota de tinta china en el portaobjetos. Es crucial mezclar bien pero evitar la formación de burbujas, ya que pueden confundirse con cápsulas.
- Con cuidado, coloca un cubreobjetos de manera uniforme y sin burbujas. Presiona suavemente para extender la preparación. El espesor del frotis debe ser fino.
- Comienza la observación microscócpica con el objetivo de menor aumento (10x) para obtener una vista panorámica y localizar las zonas de interés. Luego, cambia al objetivo de 40x. Observarás un fondo oscuro debido a la tinta china. Si hay hongos encapsulados presentes, verás células levaduriformes (redondas u ovaladas) rodeadas por un halo claro y transparente que corresponde a la cápsula, entre la célula y el fondo oscuro.
